PCR用DNA聚合酶的特性，實(shí)現(xiàn)了DNA片段的體外指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。而qPCR則在此基礎(chǔ)上引入了熒光探針或染料，實(shí)現(xiàn)了對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和定量分析。接下來(lái)一起來(lái)了解下兩種技術(shù)背后的原理及應(yīng)用差異。

  PCR和qPCR區(qū)別

     PCR

  聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種基礎(chǔ)生物分子學(xué)技術(shù)，用于在體外大量擴(kuò)增特定的DNA片段。其原理是通過(guò)溫度循環(huán)（預(yù)變性——用于激活熱啟動(dòng)酶和確保模板DNA完全變性、變性、退火、延伸）等步驟，經(jīng)過(guò)多次循環(huán)使DNA聚合酶催化合成新的DNA鏈。

•   定量能力：PCR主要關(guān)注目標(biāo)DNA序列的擴(kuò)增，而不直接提供擴(kuò)增產(chǎn)物的定量信息。
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•   應(yīng)用：PCR應(yīng)用領(lǐng)域包括基因克隆、遺傳病診斷、法醫(yī)鑒定、基因表達(dá)研究的初步篩查等行業(yè)。
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•   結(jié)果分析：通過(guò)凝膠電泳來(lái)觀察擴(kuò)增產(chǎn)物，根據(jù)產(chǎn)物條帶的大小和亮度判斷是否存在目標(biāo)序列，但無(wú)法精確測(cè)量其量。

  qPCR

  實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)是在PCR基礎(chǔ)上添加了熒光檢測(cè)系統(tǒng)，如實(shí)驗(yàn)中?？吹降臒晒馓结樆驘晒馊玖?，能夠在實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA或cDNA拷貝數(shù)的定量分析。

•   高敏感度和精確度：由于能夠?qū)崟r(shí)檢測(cè)擴(kuò)增過(guò)程，qPCR可以提供目標(biāo)序列精確濃度信息，定量范圍更廣，靈敏度和精確度也遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)PCR。非常適合低拷貝數(shù)DNA的檢測(cè)和基因表達(dá)水平的精確測(cè)量。
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•   應(yīng)用：qPCR應(yīng)用領(lǐng)域包括基因表達(dá)分析、病原體定量、疾病診斷、藥物篩選等領(lǐng)域，尤其在需要精確測(cè)量基因表達(dá)變化的研究中至關(guān)重要。
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•   結(jié)果分析：通過(guò)擴(kuò)增曲線和熔解曲線分析，不僅能夠定量，還能評(píng)估擴(kuò)增的特異性。熔解曲線的峰形和峰值溫度可以反映PCR產(chǎn)物的特異性，例如，單一的尖銳峰形通常表示產(chǎn)物特異性高，而多個(gè)峰或?qū)挿鍎t可能提示存在非特異性擴(kuò)增或引物二聚體。

  總而言之，PCR和qPCR都是強(qiáng)大的分子生物學(xué)工具，但它們?cè)诠δ芎蛻?yīng)用上存在顯著差異。PCR主要用于DNA片段的擴(kuò)增，而qPCR則更側(cè)重于DNA的定量分析。選擇哪種技術(shù)取決于具體的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮托枨?。如果只需要確定目標(biāo)序列是否存在，那么PCR就足夠了；但如果需要精確測(cè)量目標(biāo)序列的濃度或基因表達(dá)水平，那么qPCR則是更好的選擇。

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