ELISA技術(shù)中抗原與抗體的反應(yīng)
ELISA是一種免疫測定。免疫測定(immunoassay, IA) 是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測定標本的方法。在檢驗中主要通過抗原抗體反應(yīng)檢測體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。
ELISA技術(shù)中抗原與抗體的反應(yīng)
抗原抗體反應(yīng)
可逆性抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡，其反應(yīng)式為Ag+Ab-+Ag*Ab抗體的親和力(親和)是抗原抗體間的固有結(jié)合力，可以平衡常數(shù)<表示：K=[Ag-Ab]/[Ag][Ab]。AG-Ab的解離程度與K值有關(guān).高親和力抗體的抗原結(jié)合點與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離.解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性，因此可用親和層析法來提純抗原或抗體.在抗血清中，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層折純抗體，應(yīng)用于免疫測定中可得到更好的效果.
免疫測定在檢驗中的應(yīng)用
1、體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。
2、激素，包括小分子量的甾體激素等。
3、抗生素和藥物。
4、病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。
5、另外，也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等。
ELISA技術(shù)中抗原與抗體的反應(yīng)如上所述，免疫測定是一種很敏感的測定方法，抗原抗體反應(yīng)后直接測定形成的沉淀或濁度，敏感度可達5~10μg/ml,但在檢驗中，某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平，因此要尋找增加敏感度的方法。標記的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以標記，通過測定標記物來提高敏感度。在放射免疫測定和酶免疫測定中，標記物分別為放射性核素和酶，最后用測定放射性和酶活力來計算待檢物的量，敏感度可比直接測定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標記免疫測定中，一-般加入過量的標記試劑以保證與待測物徹底反應(yīng)。以標記抗體(Ab※)檢測抗原(Ag)為例，反應(yīng)式如下: Ag+ Ab※→AgAb※+ Ab※。在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※，如不將兩者分離而測定標記物，測得的結(jié)果將為兩者之和。因此，游離標記物與結(jié)合標記物的分離是標記免疫測定中的重要步驟?？刹捎枚喾N手段，固相載體是其中之一。如將抗原或抗上，而游離的標記物留于溶液中。這樣可以通過洗滌將游離的Ab※除去，結(jié)合標記物的測上，而游離的標記物留于溶液中。這樣可以通過洗滌將游離的定可在固相上進行。Ab※除去，結(jié)合標記物的測
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