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產(chǎn)品中心

  • Hela-Cas9-531穩(wěn)定表達的人宮頸癌細胞

    規(guī)格:
    價格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-CC6680
    • 應用 : 僅供科研使用
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 規(guī)格 :1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
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基本信息

細胞名稱

Hela-Cas9-531穩(wěn)定表達的人宮頸癌細胞

細胞品牌

通蔚生物

細胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞英文

Hela-Cas9-531細胞

細胞簡介

該細胞是采用慢病毒感染的方式使Hela細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo,經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆,經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白,可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

種屬來源

組織來源

子宮

疾病特征

宮頸癌

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

生長特性

貼壁生長

 養(yǎng) 

RPMI 1640,90% ;FBS,10%

生長條件

氣相:空氣,95% ;二氧化碳,5% ; 溫度:37℃

傳代方法

1:2至1:6,每周2次

凍存條件

90%完全培養(yǎng)基+10%DMSO,液氮儲存

支原體檢測

陰性

發(fā)貨方式

快遞運輸(特殊情況的另處理)

供應范圍

僅限于科研實驗使用,不得用于其它用途


接受后處理

處理1

收到細胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們

處理2

請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h

處理3

棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基

處理4

如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基

處理5

接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系


細胞操作

復蘇細胞

將含有1mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代

如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng):

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.  1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.  6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞凍存

待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類:

1. 棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入1ml 胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存1ml 細胞懸液,注意凍存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,責任由客戶自行承擔。

3. 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細胞無活力,請拍下照片及時和我們聯(lián)系,信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4. 靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,留6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng),待細胞匯合度80%左右時正常傳代。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng),培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。


售后服務

細胞予重發(fā)

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題,細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā)

2. 收到細胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)。

3. 收到細胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,重發(fā)。

4. 常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后,干冰凍存發(fā)貨細胞復蘇2天后,絕大多數(shù)細胞未存活,經(jīng)核實后,重發(fā)

5. 常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后,出現(xiàn)污染經(jīng)核實后,重發(fā)。

6. 細胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā)。

細胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細胞污染,不重發(fā)。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。

3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。

4. 細胞狀態(tài)不好,未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片,不重發(fā)。

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā)。

6. 收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā)

特別說明

上海通蔚生物客戶在細胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務電話021-54845833或15800441009,我們隨時給予實驗中的免費解答。

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