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產(chǎn)品中心

  • HEK293-FT人胚腎細(xì)胞

    規(guī)格:
    價(jià)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號(hào) : TW-CC6272
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 規(guī)格 :1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
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基本信息

細(xì)胞名稱(chēng)

HEK293-FT人胚腎細(xì)胞

細(xì)胞品牌

通蔚生物

細(xì)胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞英文

HEK293FT細(xì)胞

細(xì)胞簡(jiǎn)介

如果要使用 ViraPower? 慢病毒表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生高滴度的慢病毒,293FT 細(xì)胞系是理想的選擇。293FT 細(xì)胞系是生長(zhǎng)快速,非常易于轉(zhuǎn)染的克隆分離物,來(lái)自通過(guò) SV40 大 T 抗原轉(zhuǎn)化的人胚胎腎細(xì)胞。 ViraPower? 表達(dá)載體和 ViraPower? 慢病毒包裝混合物 (ViraPower? Lentiviral Packaging Mix) 共轉(zhuǎn)染進(jìn) 293FT 細(xì)胞中時(shí),可形成高水平的病毒 RNA 及包裝所需的 gag/pol 和 rev 蛋白。

種屬來(lái)源

組織來(lái)源

胚腎

疾病特征

正常

支原體檢測(cè)

陰性

細(xì)胞形態(tài)

圓形

生長(zhǎng)特性

貼壁生長(zhǎng)

特征特性

該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)SV40大T抗原,并且促進(jìn)最適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生

生長(zhǎng)條件

氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% ; 溫度:37℃

傳代方法

細(xì)胞密度> 5×105 cells/ml

優(yōu) 勢(shì)

增長(zhǎng)迅速 高效轉(zhuǎn)染 高病毒滴度 極高的蛋白表達(dá)水平

重要特性

來(lái)源于SV40大T抗原轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞,是具有高度可轉(zhuǎn)然性的克隆分離產(chǎn)物。存在SV40大T抗原蛋白能從含SV40起點(diǎn)的載體上進(jìn)行非常高水平的表達(dá)。實(shí)際上它比以往使用的293細(xì)胞或T抗原轉(zhuǎn)化的COS細(xì)胞表達(dá)水平更高。

傳代情況

C3

養(yǎng)

DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10% FBS;0.1 mM MEM Non-Essential + Amino Acids (NEAA) + 2 mM L-glutamine + 1% Pen-Strep (optional) + 500 ?g/ml Geneticin

凍存條件

基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

發(fā)貨方式

快遞運(yùn)輸(特殊情況的另處理)

供應(yīng)范圍

僅限于科研實(shí)驗(yàn)使用,不得用于其它用途


接受后處理

處理1

收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液 ,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們

處理2

請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h

處理3

棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基

處理4

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基

處理5

接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系


細(xì)胞操作

復(fù)蘇細(xì)胞

將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞傳代

如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng):

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞凍存

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi):

1. 棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存1ml 細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力,如果證實(shí)細(xì)胞活力正常, 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力,請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

4. 靜置細(xì)胞貼壁后,請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng),待細(xì)胞匯合度80%左右時(shí)正常傳代。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶(hù)自備的培養(yǎng)基混合,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。


售后服務(wù)

細(xì)胞予重發(fā)

1. 細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問(wèn)題,細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā)

2. 收到細(xì)胞未開(kāi)封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)。

3.收到細(xì)胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。

4.常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。

5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)

6. 細(xì)胞活性問(wèn)題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。

細(xì)胞不予重發(fā)

1. 客戶(hù)操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā)。

2. 客戶(hù)嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。

3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā)

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的,不重發(fā)。

6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,不重發(fā)。

特別說(shuō)明

上海通蔚生物客戶(hù)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,有任何技術(shù)問(wèn)題可以撥打免費(fèi)服務(wù)電話(huà)021-54845833或15800441009,我們隨時(shí)給予實(shí)驗(yàn)中的免費(fèi)解答。


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