細(xì)胞名稱

Hela-Cas9-528穩(wěn)定表達(dá)的人宮頸癌細(xì)胞

細(xì)胞品牌

通蔚生物

細(xì)胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞英文

Hela-Cas9-528細(xì)胞

細(xì)胞簡(jiǎn)介

該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使Hela細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

種屬來(lái)源

人

組織來(lái)源

子宮

疾病特征

宮頸癌

細(xì)胞形態(tài)

上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性

貼壁生長(zhǎng)

培 養(yǎng) 基

RPMI 1640，90%；FBS，10%

生長(zhǎng)條件

氣相：空氣，95% ；二氧化碳，5% ; 溫度：37℃

傳代方法

1：2至1：6，每周2次

凍存條件

90%完全培養(yǎng)基+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存

支原體檢測(cè)

陰性

發(fā)貨方式

快遞運(yùn)輸(特殊情況的另處理)

供應(yīng)范圍

僅限于科研實(shí)驗(yàn)使用，不得用于其它用途

處理1

收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液 ，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們

處理2

請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h

處理3

棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基

處理4

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基

處理5

接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系

復(fù)蘇細(xì)胞

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞傳代

如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng):

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞凍存

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類:

1. 棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入1ml 胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出，留6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì)胞匯合度80%左右時(shí)正常傳代。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

細(xì)胞予重發(fā)

1. 細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。

2. 收到細(xì)胞未開(kāi)封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3. 收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

4. 常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

6. 細(xì)胞活性問(wèn)題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

細(xì)胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。

2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的，不重發(fā)。

6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)。

特別說(shuō)明

上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，有任何技術(shù)問(wèn)題可以撥打免費(fèi)服務(wù)電話021-54845833或15800441009，我們隨時(shí)給予實(shí)驗(yàn)中的免費(fèi)解答。