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品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

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產(chǎn)品中心

  • 人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)試劑盒

    規(guī)格:
    價(jià)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號(hào) : TW15368
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 規(guī)格 :48T/96T
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人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP) ELISA試劑盒

僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!

產(chǎn)品概述

本人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP) 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理,用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)的含量。IL-18BP是IL-18的拮抗劑,能夠阻止IL-18和IL-18受體之間的相互作用,從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。該試劑盒廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究領(lǐng)域,幫助研究人員了解IL-18BP在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。

白介素試劑盒

特點(diǎn)

  • 高靈敏度:最低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。
  • 優(yōu)異特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。
  • 良好重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。
  • 檢測(cè)范圍廣:6.25 pg/mL – 200 pg/mL。

白介素試劑盒組成

名稱(chēng) 96 孔配置
48 孔配置 備注
微孔酶標(biāo)板
8 孔×12 條
8 孔×6 條
無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品
0.3mL*6 管
0.3mL*6 管
無(wú)
樣本稀釋液
6mL
3mL
無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP
10mL
5mL
無(wú)
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物 A
6mL
3mL
無(wú)
底物 B
6mL
3mL
無(wú)
終止液
6mL
3mL
無(wú)
封板膜
2 張
2 張
無(wú)
說(shuō)明書(shū)
1 份
1 份
無(wú)
自封袋
1 個(gè)
1 個(gè)
無(wú)
空白稀釋板
1 塊
1 塊
選配
橡膠手套
2 副
2 副
選配

  • 包被板:96孔板,預(yù)包被人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)捕獲抗體
  • 標(biāo)準(zhǔn)品:6種不同濃度的人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)標(biāo)準(zhǔn)品(200、100、50、25、12.5、6.25 pg/mL)
  • 檢測(cè)抗體:辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體
  • 洗滌液:20×濃縮洗滌緩沖液
  • 底物溶液:A、B兩組分
  • 終止液
  • 樣本稀釋液

備注

  • 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:200、100、50、25、12.5、6.25 pg/mL。
  • 經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)原理

人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP) 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

樣本處理及要求

  1. 血清: 將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,然后1000×g離心20分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
  2. 血漿: 用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
  3. 組織勻漿: 用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。
  4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本: 請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意: 標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

白介素試劑盒操作步驟

  1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
  3. 樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
  4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
  6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。

白介素試劑盒性能

  • 檢測(cè)范圍:6.25 pg/mL – 200 pg/mL。
  • 靈敏度:最低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。
  • 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。
  • 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。

白介素試劑盒說(shuō)明

  1. 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。
  2. 最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
  3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,網(wǎng)站電子版說(shuō)明書(shū)僅作參考。
  4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到最佳的檢測(cè)結(jié)果。
  5. 本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。
  6. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
  7. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類(lèi)樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測(cè)不出的情況。
  8. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測(cè)出。

需要而未提供的試劑和器材

  • 酶標(biāo)儀(450nm)
  • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  • 37℃恒溫箱
  • 蒸餾水或去離子水

試劑準(zhǔn)備

  • 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
  • 20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

[注意事項(xiàng)]

  1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
  2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
  3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
  4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
  5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
  6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
  7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
  8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
  9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
  10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
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